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两种酶的反应缓冲液不一样,做双酶切时如何处理?

如果是分开酶切的话,第一个酶切完成后要回收(可用醇回收,效率比较高)后,再进行第二次酶切。你可以尝试双酶切,buff...

你是不是要把双酶切后的质粒与载体连接,而无论是PCR还是载体都无法通过电泳判断是否酶切完全,所以不好进行连接呀?对于PCR产物一般会采取这样的策略,将产物首先连接到T载体上,然后再用设计好的双酶切,电泳回收切下的条带,这样就能确保得到...

1、如果你用的是Takara的酶,应该就只能分步了,而且BamHI还是30度反应,虽然也可以在37度切,但如果是分步切的话还是用30度吧。 2、为什么不用NEB的酶呢?可以用buffer1或2同时切(好像是,你需要自己再确认下),而且NEB的这两种酶都有HF酶,...

1. NEB 酶为限制性内切酶,对目的片段特异性序列进行识别与酶切; 2. Buffer的作用是维持反应体系的酸碱度的稳定。

你这到底是切过了还是没切就跑胶埃。。

1. NEB 酶限制性内切酶目片段特异性序列进行识别与酶切; 2. Buffer作用维持反应体系酸碱度稳定 感觉这样的提问没有意义 建议自己下去查查资料

双酶切反应 (Double Digests) 1、同步双酶切 同步双酶切是一种省时省力的常用方法。选择能让两种酶同时作用的最佳缓冲液是非常重要的一步。NEB每一种酶都随酶提供相应的最佳NEBuffer,以保证100%的酶活性。NEBuffer的组成及内切酶在不同缓冲液中...

Enzyme Cat # Temp Supplied NEBuffer SAM % Activity in NEBuffer 1.1 2.1 3.1 CutSmart EcoRI R0101 37°C NEBuffer EcoRI no 25 100* 50 50* HindIII R0104 37°C NEBuffer 2.1 no 25 100 50 50 Double Digest Recommendations for EcoRI + Hin...

使用配有特殊缓冲液的酶进行双酶切也不复杂。在大多数情况下,采用标准缓冲液的酶也能在这些特殊缓冲液中进行酶切。这保证了对缓冲液有特殊要求的酶也能良好工作。由于内切酶在非最佳缓冲液中进行酶切反应时,反应速度会减缓,因此需要增加酶量...

BUFFER 2 如果KPN1是HF的就用4

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