ppts.net
当前位置:首页>>关于双酶切时,是直接用pcr产物就可以,还是需要的资料>>

双酶切时,是直接用pcr产物就可以,还是需要

1、回收PCR产物: 在进行PCR扩增时候,给引物两端设计好酶切位点,一般说来,限制酶的 选择非常重要,尽量选择粘端酶切和 那些酶切效率高的限制酶,如BamHI,HindIII,提前看好各公司的双切酶所用公用的BUFFER,以及各酶在公用BUFFER里的效率。...

不可以。 首先,采用的是质粒模板; 其次,扩增得到的非单一条带,如果不纯化直接酶切,那么得到的将是带有相应酶切位点的几种片段,继续试验的话,菌落PCR鉴定时可能会出现几种不同大小的条带。 第三、PCR产物里面缓冲液并不是合适的酶切缓冲液...

PCR产物经PCR纯化试剂盒纯化后,可以做EcoRI和BamHI的双酶切。酶切、纯化都可以用PCR纯化试剂盒完成,只有一种情况例外,PCR模板为质粒,且这个质粒和要用的载体有相同的抗性。此时需要跑一次胶来丢掉模板质粒,否则在连接产物转化的平板上长出...

1、你的实验目的是什么? 2、如果是克隆,连接T载体后不用酶切,直接转化菌落pcr检测有目的条带的话送样测序即可。 3、如果是做表达载体构建,pcr产物和质粒DNA酶切后与没有酶切的在同一块胶上电泳,如果两个酶切位点很近,几乎看不到被切下来的...

还是用你之前设计的酶切位点的相关引物,你是要做什么样的片段设计,就把相应的引物设计在片段的上下游,只有对应大小的条带,说明就是初步正确的,但是不能说名没有单核苷酸突变,所以最后还是要送公司测序。

理论可以,但是会影响效率。你到底是先酶切还是直接用T载体连接呢?

做双酶切首先要确定两个酶使用的buffer是否相同,可以到酶供应商的网站上查询(NEB,MBI,TAKARA等) NEB的双酶切表 http://img.dxy.cn/upload/2006/08/13/31219184.pdf 。 同步双酶切 同步双酶切是一种省时省力的常用方法。选择能让两种酶同时作...

你是不是要把双酶切后的质粒与载体连接,而无论是PCR还是载体都无法通过电泳判断是否酶切完全,所以不好进行连接呀?对于PCR产物一般会采取这样的策略,将产物首先连接到T载体上,然后再用设计好的双酶切,电泳回收切下的条带,这样就能确保得到。

1. 首先确认PCR产物,取一小部分PCR产物跑胶。 2. 如果产物良好,一个特异性很强的条带,则用过柱的方法提纯(就是你平时用的从溶液中纯化DNA的试剂盒就可以)。楼上说的跑胶后再提,早就过时了。效率很低。 3,提纯加入限制性内切酶缓冲液,酶...

在设计pcr引物时,会将酶切位点设计在引物里面,但是pcr后的片段是双链平末端,需要将设计的酶切位点粘性末端暴露出来,所以需要酶切处理。

网站首页 | 网站地图
All rights reserved Powered by www.ppts.net
copyright ©right 2010-2021。
内容来自网络,如有侵犯请联系客服。zhit325@qq.com